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臺式低速離心機如何從植物鹽藻中分離葉綠體

2016/3/24 9:15:26??????點擊:

取培養7d 的藻細胞培養液利用臺式低速離心機采用離心力4500g 離心10min,細胞沉淀重懸在新鮮的生長培養

基中充分洗滌,然后4500g 離心10min,除去一些細胞外的粘稠物.

將離心得到的細胞沉淀重懸在冰預冷的15mL 分離緩沖液( 1mol/ L Sorbitol,50mmol/ L Hepes,2mmol/ L EDTA,1mmol/ L MnCl2,1mmol/ LMgCl2,0.5% BSA,0.1 mol/ L DTT,用KOH 調節到pH 7.5) 中.

將15mL 重懸細胞液進行冰浴超聲波破碎,超聲波功率200W,共作用64s,每次作用時間8s,間隔時間9.9s.然后4℃2000g 離心10min,沉淀重懸在3mL 的分離緩沖液中,作為葉綠體粗提液.

將葉綠體粗提液加在蔗糖密度梯度( 30%/ 45%/ 59% ,30mL) 上,4℃40000g 離心30min,吸取45%和59% 之間的條帶( 約5mL) ,用3 倍體積的清洗緩沖液( 1 mol/ L Sorbitol,25mmol/ L Hepes,用KOH 調節到pH 7.5) 清洗收集物,4℃2000g 離心10min,沉淀即為完整的葉綠體.

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